MÉTODO DE LANE-EYNON (TAMBÉM CONHECIDO COMO MÉTODO DE FEHLING)

1) PRINCÍPIO

A determinação do teor de glicídios é realizada através do Método de Lane-Eynon, com utilização do Reagente de Fehling. O Método de Lane-Eynon baseia-se na redução de volume conhecido do reagente de cobre alcalino (Fehling) a óxido cuproso. O ponto final é indicado pelo azul de metileno, que é reduzido a sua forma leuco por um pequeno excesso de açúcar redutor.

A solução de açúcar é adicionada vagarosamente de uma bureta de Fehling a uma mistura em ebulição das duas soluções de Fehling. Próximo ao ponto de viragem é adicionado 1mL de uma solução aquosa de azul de metileno 2%, que muda a cor da solução de azul para incolor no ponto de viragem. A solução fica incolor, mas como existe o precipitado cor de tijolo, a cor visível da viragem é de azul para vermelho tijolo. Existem dois fatores importantes a serem seguidos neste método para maior exatidão dos resultados:

1. A solução deve ficar constantemente em ebulição durante a titulação , porque o Cu2O formado pode ser novamente oxidado pelo O2 do ar e muda a cor novamente para azul.
2. A titulação deve levar no máximo 3 minutos porque pode haver decomposição dos açúcares com o aquecimento prolongado.

2) PADRONIZAÇÃO DO REAGENTE DE FEHLING

1. Preparar a solução padrão de glicose: pesar 0,500g de glicose pura (seca em estufa a vácuo ou regulada a 70ºC, durante 1h) e diluir a 100mL em balão volumétrico.
2. Colocar numa bureta de Fehling a solução padrão de glicose.
3. Transferir com pipeta volumétrica 10mL de solução Fehling A e 10mL de solução Fehling B para balão de titulação Fehling ( balão de fundo chato). Adicionar 40mL de água destilada juntamente com algumas pérolas de ebulição. Montar a estrutura e iniciar o aquecimento em bico de Bunsen.
4. Quando iniciar a fervura, começar a gotejar a solução-padrão até quase o final da titulação.
5. Quando iniciar o descoramento (perda da coloração azul), adicionar 1 gota de azul de metileno a 1% e completar a titulação até descoramento do indicador.
6. O tempo de titulação não deve ultrapassar 3 minutos. O ponto final da titulação será em torno de 10mL de glicose. Anotar o volume gasto.

Cálculo do título da solução Fehling:

FC = mL gastos de glicose x 0,5
                  100
O FC será utilizado nos próximos cálculos.

3) MÉTODO DE DETERMINAÇÃO DE AÇÚCARES REDUTORES (em glicose)

APLICAÇÃO Aplica-se em produtos enlatados, salsicharia, queijos e outros produtos alimentícios que tenham em sua composição até 5% de açúcares (pesar 25g). E em produtos com alto teor de glicose como mel, geléias, etc (pesar 1g).

PROCEDIMENTO

1. Pesar a amostra homogeneizada em béquer de 250mL (anotar o peso).
2. Adicionar 50mL de água destilada e homogeneizar com bastão de vidro.
3. Transferir para balão volumétrico de 250mL (não completar o volume).
4. Adicionar 2mL de ferrocianeto de potássio a 15% e 2mL de acetato de zinco a 30%. Agitar bem e completar o volume.
5. Aguardar a floculação e sedimentação do material. Filtrar, identificando o frasco que recebe o filtrado.
6. Colocar o filtrado na bureta.
7. Pipetar volumetricamente 5mL de Fehling A e 5mL de Fehling B para o balão de titulação Fehling. Adicionar algumas pérolas de ebulição.
8. Adicionar 40mL de água destilada. Aquecer até ebulição e gotejar a solução da amostra até que inicie o descoramento. Adicionar 1 gota de azul de metileno a 1% e completar a titulação até descoramento do indicador
9. Mantendo a ebulição, adicionar 1 gota de azul de metileno a 1% e continuar a titulação até descoloração do indicador. Anotar o volume gasto.

CÁLCULOS

Glicídios redutores em glicose (%) = FC/2 x 250 x 100
                                           V x P
Onde:
	FC = título da solução de Fehling 
	V = volume da amostra gasto na titulação, em mL
	P = peso da amostra em g

4) MÉTODO DE DETERMINAÇÃO DE AÇÚCARES TOTAIS

APLICAÇÃO Aplica-se a produtos enlatados, de salsicharia, queijos e outros produtos alimentícios que tenham até 5% de açúcares em sua composição (pesar 25g). Produtos com alto teor de sacarose, pesar 1g.

PRINCÍPIO Como os grupos redutores aldeído e cetona não se encontram livres na sacarose, efetua-se uma hidrólise ácida. O resultado são duas moléculas de açúcares redutores, uma de glicose e outra de frutose, que são determinadas pelo método de Lane-Eynon.

PROCEDIMENTO

1. Pesar a amostra homogeneizada em Erlenmeyer de 250 mL. Anotar o peso da amostra.
2. Adicionar 50mL de água destilada e dissolver a amostra.
3. Adicionar 2mL de ácido clorídrico concentrado (na capela) e levar ao banho-maria (60°C) por 60 min.
4. Esfriar e neutralizar com hidróxido de sódio 50%, usando papel indicador de pH.
5. Seguir os procedimentos 3 a 9 do Método açúcares redutores.

CÁLCULOS

Glicídios Totais (glicose + sacarose)% = FC/2 x 250 x 100
                                              V x P
Onde:
	FC = título da solução de Fehling 
	V = volume da amostra gasto na titulação, em mL
	P = peso da amostra em g

Cálculo dos glicídios não redutores:
Glicídios não redutores em sacarose (%) = (Glicídios Totais – Glicídios Redutores) x 0,95
0,95 = fator de conversão da sacarose.

5) MÉTODO DE DETERMINAÇÃO DE AMIDO

APLICAÇÃO Produtos com amido na sua formulação.

PRINCÍPIO O amido não apresenta reação redutora. Uma hidrólise enérgica em meio fortemente ácido produz exclusivamente glicose, sendo determinada pelo método de Lane-Eynon.

PROCEDIMENTO

1. Pesar 10 g de amostra homogeneizada em Erlenmeyer de 250 mL. Anotar o peso da amostra.
2. Adicionar 50mL de água destilada e dissolver a amostra.
3. Adicionar 10mL de ácido clorídrico concentrado (na capela).
4. Autoclavar a 120º C durante 30 min.
5. Esfriar e neutralizar com hidróxido de sódio 40%, usando papel indicador de pH.
6. Seguir os procedimentos 3 a 9 do Método açúcares redutores, colocando 4 mL de cada interferente.

Obs: para amostras com alto teor de amido deve ser realizada uma digestão alcalina antes da digestão ácida.

CÁLCULOS

Amido (%) = [ FC/2 x 250 x 100 – açúcares totais (%)  ]  x 0,90
                   V x P
Onde:

	FC = título da solução de Fehling 
	V = volume da amostra gasto na titulação, em mL
	P = peso da amostra em g
	0,90 = fator de transformação de glicose em amido

Referências: CARVALHO et al.(2002); INSTITUTO ADOLFO LUTZ (2008)

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